CO-IP实验操作详解与注意事项指南

手把手教学——CO-IP实验操作及注意事项

教学手柄:联合体验和要点的过程的详细说明

co-IP,即免疫关节的技术,是研究蛋白质相互作用的一种常见方法,基于抗体和抗原的特定混合物。
基本原理是确定和整合抗原(红色三角形)和抗体(例如紫色树脂上的抗体),以捕获蛋白质(哥伦比亚蓝蛋白)与抗原。
以下是对操作步骤和预防措施的详细解释:

1。
除非专门的蛋白质去除,然后通过开裂和沉淀收集所需的蛋白质。
使用绝缘蛋白样品挣扎和恢复,最后转到分离SDS-PAGE胶。

2。
SDS-PAGE分离和旋转

确定适当的凝胶浓度(根据目的地的尺寸)和样品后的电性能。
在膜的核心中,确保膜的光滑恶性肿瘤,闭合和耐药性苗圃,并导致随后的免疫测试。

3。
在显示和预防措施期间

开发电流时,有必要准确控制缓解,托儿所时间和抗体温度,使用新的配置显示解决方案,并注意从DAB中运行安全性。
在实验过程中,有必要确保在整个过程中确保快速运行,避免污染并戴上手套,尤其是在处理小分子蛋白时,您需要使用0.20万件电影。

5。
经验储备

除了上述过程的详细信息外,您还需要注意控制样品,以及使用膜和临时存储在同一时间检测分子蛋白,您可以考虑使用梯度胶。
应使用显示解决方案来澄清它,以确保膜在开发前不干燥。

实验方法丨免疫共沉淀技术(Co-IP)(第一期)

Co-IP或CoIP)是研究蛋白质相互作用的主要工具,该工具可以从细胞中捕获预期的蛋白质及其相互作用蛋白。
在生理条件下,通过抗体富集研究的靶蛋白和结合蛋白是确定整个细胞中淡蛋白相互作用的有效方法。
CO-IP实验包括以下步骤:首先,将靶细胞蛋白作为诱饵,并使用靶蛋白鉴定和总细胞蛋白的特殊抗体孵育以形成免疫复合物; 然后,添加A/G蛋白(预旋转前旋转(在琼脂症凝胶或磁珠中预组合)以捕获与预期蛋白相互作用以形成复合物的蛋白质。
清洁和清洁凝胶电泳,西方技术或西方技术或通过co-IP实验,质谱仪鉴定蛋白质或复合物中的其他蛋白质。
未知的蛋白质以及有关连接蛋白质相互作用的进一步研究。
一系列的琼脂糖凝胶含有蛋白质/g/a+用于免疫降雨的蛋白质,以及各种标签和凝胶蛋白和免疫沉淀集。
Beyomag™系列磁珠™提供IgG系列磁珠,熔融标签的磁珠和免疫沉积集,以及经过专门设计的磁分离设备,以帮助使用磁性颗粒的快速分裂。
此外,Biyuntian还提供了一系列辅助试剂,例如西部细胞破裂和IP的溶液,RIP开裂液,解决裂纹和负载,以解决免疫降雨后西部检测期间干预的问题。
Biyuntian不仅提供产品支持,还提供与CO-IP相关的技术服务,包括免疫当代和质谱检测,以满足不同的研究需求。
Biyuntian Co-IP应用的案例表明,该技术在科学研究中的广泛应用。
这些应用证明,Co-IP技术揭示了蛋白质与新治疗策略发展之间相互作用的复杂关系的巨大潜力。

免疫共沉淀实验的原理与过程?

常见的免疫经验是一种寻找蛋白质相互作用的常见方法。
COIP实验原则:常见的IP实验与特定规定相结合。
免疫免疫的实验过程:1。
细胞细胞:首先,细胞或裂纹需要释放内部蛋白质以实现靶蛋白。
2。
抗体的缔合:然后,A/G渗透到已知与靶蛋白相互作用以靶向相互作用的蛋白质相互作用的被掠夺产物中。
3。
通过洗涤和离心过程,除非去除指定的链接蛋白,否则最终纯化的蛋白质以及电气技术和其他技术的数量,以评估目标蛋白质与潜在相互作用伙伴之间的相互作用。
4。
反应性蛋白质测试:您可以使用WesternBlot,ELISA和其他技术对沉淀蛋白进行定性和定量分析,以识别其中的相互作用蛋白,监视信息,其大小,表达,大小和。
Co-IP体验是一种快速,可靠和可靠的搜索方法,可与高度的隐私和过敏。
它的主要优点是,通过传输荧光共振能量和文档BRE引入高分析方法。

COIP 原理与实验流程

1。
COIP:COIP(共侵蚀)是免疫共同处方。
性互动; 免疫融合设计的概念是,众所周知蛋白质的成员的假设是大蛋白质复合物的成员,然后使用该蛋白质和蛋白质/g珠的特定抗体可以与抗体结合,它们可以是它们可以是可以是整个蛋白质的整个蛋白质。
BB认识到蛋白质是否与蛋白质和蛋白质一样好。
免疫合作的特征可以总结为两个点。
其次,实验过程大约实验过程:裂纹细胞:蛋白质液体细胞开裂和抗体孵育的总溶液:蛋白质抗体磁珠和蛋白质抗体的INCUBA:蛋白质抗体 - 磁性清洗复合物:去除非特异性蛋白质洗涤的合并蛋白质变化:与BB或质谱仪的重磁珠共享蛋白质抗体复合物。
查看抗体是否可用于IP实验。
如下图所示,在ABCAM中的应用范围和某种抗体的应用量,购买时请注意。
当您包括椎骨的功能时,为了避免对椎骨损坏,请使用较大的口径或切开枪头添加样品。
注意添加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂; 避免蛋白质降解的影响。
渴望细胞应使用软破裂试剂,并且不能破坏蛋白质之间的相互作用。
当然,并非所有蛋白质都有相应的IP抗体。
第四,操作步骤1。
PBSPBS洗细胞3次,最后一次干燥PBS; 2。
在混合物中加入破裂的IP细胞缓冲液前30分钟; IP样品(尤其取决于抗体描述),并在IgG样品中添加2uligg抗体,以旋转并孵育过夜; 上清洁; 用于10分钟。
PS:按计划,生物学已经深入培养了很多年,并拥有丰富的经验。
欢迎交流与合作。

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